注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。

测定原理

在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样品提取液在510nm处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。

自备实验用品及仪器

天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：60%乙醇，自备。

试剂一：液体2mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体2mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。

类黄酮提取

将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.02g，加入2mL提取液，60℃振荡提取2h，10000g，25℃，离心10min，取上清待测。

测定操作表

	空白管	测定管
样本待测液（µL）		540
蒸馏水（µL）	540
试剂一（µL）	30	30
混匀，25℃静置6min
试剂二（µL）	30	30
混匀，25℃静置5min
试剂三（µL）	400	400
混匀，25℃静置15 min，测定510nm处吸光值。ΔA=A测定-A空白，空白管只要做一管。

类黄酮含量计算公式

标准曲线：y = 5.02x+0.0007，R2 = 0.9996

类黄酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷5.02÷(W÷V样总)

= 0.398×（ΔA -0.0007）÷W

V样总：加入提取液体积，2mL； V样：反应中样品体积，0.54mL； W：样品质量，g

最低检出限为10µg/g。