注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

植物酚类物质具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。

测定原理

在碱性条件下，酚类物质将钨钼酸还原，产生蓝色化合物，在760nm处有特征吸收峰，测760nm处的吸光值，即可得样品总酚含量。

自备实验用品及仪器

天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：60%乙醇，自备。

试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。

总酚提取

将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.1g，加入2.5mL提取液，60℃振荡提取2h。10000g，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至2.5mL，待测。

测定操作表

	对照管	测定管
样本待测液（µL）	50	50
试剂一（µL）		250
混匀，25℃静置2min
试剂二（µL）	250	250
H2O（µL）	700	450
混匀，25℃静置10 min，对照管调零，1mL比色皿，测定A760。

总酚含量计算公式

标准曲线：y = 5.615x+0.0012，R2 = 0.9994

总酚含量（mg/g 干重）=（A760-0.0012）÷5.615×V样÷(V样÷V样总×W)

= 0.445×（A760– 0.0012 ）÷W

V样总：加入提取液体积，2.5mL； V样：反应中样品体积，0.05mL； W：样品质量，g

注意事项

1. 吸光值大于2，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。

2. 试剂一对皮肤有一定的刺激性，请操作时做好防护措施。

3. 最低检出限为2.4 μg/g。