注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物，广泛存在于植物的各种器官中，具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用，广泛的应用于医药，食品，化妆品，保健品行业。

测定原理

在酸性条件下，植物原花青素A环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应，产生有色化合物，在500nm处有特征吸收峰，测定500nm光吸收值可计算原花青素的含量。

自备实验用品及仪器

天平、常温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、蒸馏水、盐酸、无水乙醇和甲醇。

试剂组成和配制

提取液：60%乙醇，自备，4℃保存。（30mL无水乙醇溶于20mL蒸馏水）

试剂一：8%盐酸20mL，自备，4℃保存。（1.6mL盐酸溶于18.4mL甲醇）

试剂二：粉剂0.2g×1瓶，4℃避光保存，临用前加20mL甲醇溶解。

测定工作液：临用前按照用量将试剂一和试剂二按照1:1混合。

空白工作液：临用前按照用量将试剂一和甲醇按照1:1混合。

OPC提取

称取约0.1g样本，加入2mL提取液，匀浆后，60℃振荡提取2h， 10000g，25℃，离心10min，取上清待测。

测定操作表

	对照管	测定管
样本（μL）	200	200
测定工作液（μL）		800
空白工作液（μL）	800
混匀，30℃水浴30min， 1mL玻璃比色皿，于500nm处蒸馏水调零，测定各管吸光值， 计算ΔA=A测定管-A对照管，每个测定管设一个对照管。

OPC计算公式

标准曲线：y=0.0194x+0.0006，R2=0.999

OPC含量（mg /g 鲜重）=(ΔA-0.0006）÷0.0194×V反总÷(V样÷V样总×W)×10-3

= 0.515×(ΔA -0.0006 ) ÷ W

V样总：加入提取液体积，2mL； V反总：反应总体积，1mL；V样：反应中样品体积，0.2mL； W：样品质量，g

注意事项

1、配制好的试剂二应尽快使用，4℃保存时间不超过一个月。

2、吸光度变化应该控制在0.05~0.8之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

3、最低检出限为10μg/g。