正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:
S-β-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
测定原理:
S-β-GC 能够催化对-硝基苯-β-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在 400nm 有特征光吸收。
自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×2 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 6mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂三:液体 25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。
测定步骤:
试剂名称 |
测定管 |
对照管 |
风干土样(g) |
0.05 |
0.05 |
试剂一(μL) |
25 |
25 |
室温振荡混匀 15min |
90℃振荡混匀 15min |
|
试剂二(μL) |
400 |
|
蒸馏水(μL) |
400 |
|
试剂三(μL) |
500 |
500 |
混匀, 37℃振荡反应 1h 后,立即 90℃水浴 5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却
10000g 25℃离心 10min,取上清液
上清液(μL) |
500 |
500 |
试剂四(μL) |
1000 |
1000 |
充分混匀,室温静置 2min 后,400nm 处蒸馏水调零,测定吸光值 A,计算 ΔA=A 测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-β-GC 活力计算:
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0032x -0.0027;x 为标准品浓度(μmol/L),y 为吸光值。单位的定义:每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-β-GC 活力(μmol/d /g 土样)= (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V 反总÷W÷T =138.7×(ΔA+0.0027) T:反应时间,1h=1/24d; V 反总:反应体系总体积:9.25×10-4 L;W:样本质量,0.05g
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:
S-β-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
测定原理:
S-β-GC 能够催化对-硝基苯-β-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在 400nm 有特征光吸收。
自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×2 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 6mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂三:液体 25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。
测定步骤:
试剂名称
测定管
对照管
风干土样(g)
0.05
0.05
试剂一(μL)
25
25
室温振荡混匀 15min
90℃振荡混匀 15min
试剂二(μL)
400
蒸馏水(μL)
400
试剂三(μL)
500
500
混匀, 37℃振荡反应 1h 后,立即 90℃水浴 5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却
10000g 25℃离心 10min,取上清液
上清液(μL)
500
500
试剂四(μL)
1000
1000
充分混匀,室温静置 2min 后,400nm 处蒸馏水调零,测定吸光值 A,计算 ΔA=A 测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-β-GC 活力计算:
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0032x -0.0027;x 为标准品浓度(μmol/L),y 为吸光值。单位的定义:每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-β-GC 活力(μmol/d /g 土样)= (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V 反总÷W÷T =138.7×(ΔA+0.0027) T:反应时间,1h=1/24d; V 反总:反应体系总体积:9.25×10-4 L;W:样本质量,0.05g