DNase I (RNase free)
Cat. QYR035
包装量:1000U
浓度:2U/ul
体积:500ul
保存条件:-20℃
附带试剂:10×DNase I Buffer (1ml)
保存条件:-20℃
产品说明:
本酶是将单链或双链DNA同等程度的随机分解,生成具有5’-P末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。本酶已除去蛋白酶和核酸酶,从而提高了在pH中性区域的稳定性,适用于RNA的制备。
活性定义:
以小牛胸腺DNA为底物,在25℃,pH5.0的条件下,1分钟内使反应液的260nm吸光度增加0.001所需要的酶量,定义为一个活性单位(Kunitz Unit)
实验应用:
1. 用T7或SP6 RNA Polymerase进行体外转录(In vitro transcription)时,合成RNA后,不必更换Buffer,使用Recombinant DNase I(RNase-free)即可将模板DNA降解。
2. 与DNA Polymerase I一起用于切口平移。
3. 在Mn2+存在的条件下,为鸟枪法测序(Shotgun sequencing)制作DNA文库。
4. 用于足迹法(Foot-printing)分析DNA-蛋白质相互作用。
5. 在进行RT-PCR反应前,对基因组DNA进行降解。
使用注意:
本酶已除去蛋白酶,在最适中性pH范围内稳定。反应时需要二价金属离子参与,Mg2+存在时,能随机使双链DNA产生切口;Mn2+存在时,双链DNA的两条链被分解为片段。加入EDTA可使酶可逆性失活,75℃加热10分钟则不可逆性失活。
实验例:除去RT-PCR样品中的基因组DNA
1. 在微量离心管中配制下列反应液:
RNA 10ug
10X DNase I Buffer 10ul
DNase I (RNase-free) 1ul (2U)
RNase Inhibitor 20U
DEPC-treated water, up to 100ul
2. 37℃水浴反应10min.
3. 加入1ul 0.5M EDTA (EDTA浓度5mM).
4. 75℃水浴热灭活10min.
5.进行Agarose电泳确认是否除去基因组DNA,同时测定RNA的浓度。
P.S.也可使用酚-氯仿抽提法代替热灭活。
如果基因组DNA没有被完全除去,可以适当增加DNase I (RNase-free) 的添加量,或者延长反应时间。