蛋白A琼脂糖凝胶层析柱

 

名称：蛋白A琼脂糖凝胶层析柱（PA-琼脂糖凝胶层析柱）

英文名称：Protein A Agarose Column

目录号：QYP1014

规格：1ml, 2ml, 5ml

储存形式：预装柱

保护液：20%乙醇-PBS

储存温度：4℃

 

产品介绍

蛋白A琼脂糖凝胶（PA-琼脂糖凝胶）是蛋白A与琼脂糖凝胶微球（Agarose）偶联，制备的抗体纯化（亲和层析）介质。本品适用于抗体纯化，包括人类IgG, 小鼠IgG, 兔IgG单抗和多抗的纯化。本品结构稳定，结合IgG效率高，对纯化体系pH值要求不严格，允许在pH5.0-8.0之间进行结合。

 

 

产品性能

性能	指标
基质	6%琼脂糖微球
配基	蛋白A融合蛋白
配基密度	≥6mg PA/ml 琼脂糖微球
载量	7-10mg IgG/ml 琼脂糖微球
粒径	45-165μm
推荐流速/最大流速	100/750 cm/h
pH稳定范围-工作/清洗	3~9/2~10
储存缓冲液	20%乙醇
储存温度	4℃
保质期	1年

 

 

实验例

实验名称：PA-agarose 纯化抗体

试剂及耗材准备：

平衡缓冲液：1×PBS, pH7.4

洗涤缓冲液：20mM Na2HPO4, 150mM NaCl, 2mM EDTA, pH7.4

洗脱缓冲液：100mM Glycine, pH2.7

中和缓冲液：1M Tris-HCl, pH9.0

每5-10ml血清或腹水采用1ml PA-agarose进行纯化。细胞上清中抗体浓度较低，建议盐析浓缩抗体，并使用PBS透析之后再进行过柱纯化。上柱之前，应尽可能使样本澄清。腹水中杂质较多，推荐在10000g，4℃离心20min，弃去沉淀。用滤纸过滤，再用0.44um滤器过滤，之后上柱。

如不过滤样本，直接上柱，样本中的杂质容易堵柱子，使实验时间延长，抗体纯度和产率降低。

 

实验方案

以10ml血清使用1ml PA-agarose 柱子纯化为例

1. 拔下PA-琼脂糖凝胶柱上下盖，弃去柱内液体。

2. 用10ml平衡液洗柱子。

3. 将预先处理过的血清上柱。用50ml离心管接住血清上柱流穿液，重复上柱，共上柱3次。

4. 用10ml洗涤液洗柱子。

5. 取7个1.5ml离心管，每管加入100ul中和液。

6. 加入10ml洗脱液洗脱抗体。将样本收集到上述EP管中，每管收集900ul，总体积1ml。

7. 洗脱液自然流出后，用10ml平衡液洗柱子。

8. 使用后的柱子应加入20%乙醇/PBS，盖上上下盖，直立保存在4℃。

9. 洗脱下来的抗体，立刻使用PBS在4℃透析。如不立刻进行透析，需-20℃冻存。请勿将抗体存放于洗脱液中长期保存在4℃。有部分抗体可能会产生沉淀。

10. 纯化好的抗体可用BCA蛋白定量试剂盒和SDS-PAGE电泳鉴定其浓度和纯度。

 

备注：应使用每根PA-agarose柱子纯化一种抗体，每根柱子可反复使用8-10次。不建议使用同一根柱子纯化不同种类的抗体，以免抗体互相混淆，影响实验