His-标签蛋白纯化填料

 

 

名称：His-标签蛋白纯化填料

 

英文名称：His- label protein purification filler

 

目录号：QYP1060

 

规格：10ml, 20ml

 

储存形式：50%蛋白纯化填料混悬液

 

保护液：20%乙醇-PBS

 

储存温度：4℃

 

 

产品介绍：

 

 

His-标签蛋白纯化填料是用于纯化6×His-tag重组蛋白的一种纯化介质，是由4% agarose 偶联了一种四齿螯合剂NTA所得。

 

本试剂可用于在变性或非变性条件下纯化任何系统表达的6×His-tag重组蛋白。与同类型产品Ni-NDA相比，Ni-NTA中Ni²⁺有4个共价键与NTA结合，

 

Ni-IDA中只有3个共价键。这种强结合力使得Ni-NTA中Ni的脱落率很低，与Ni-IDA相比更加稳定。本试剂可以耐受一定浓度的变性剂、

 

还原剂、耦合剂等苛刻条件，是实验室纯化His-tag重组蛋白所采用的最常用填料之一。

 

 

技术指标：

 

外观	乳白色半透明凝胶状凝胶
基质	4%琼脂糖凝胶
配体	Ni-NTA
配体密度	20-40 μmol/mL
蛋白质载量	≥10 mg/ml His-标签蛋白
耐反压	0.1MPa
粒径范围	60 ~ 180μm
工作温度	4 ~ 40℃
基质pH稳定性	3 ~ 10（长时间）；2 ~ 11（短时间）

 

 

实验方案：

 

 

1. 装柱：将His-标签蛋白纯化填料混匀。将下层筛板置于层析柱空柱底部。用剪开枪头尖的1ml枪头吸取4ml His-标签蛋白纯化填料混悬液，

 

加入层析柱空柱。待液体流出后（柱床体积2ml），向层析柱中加入PBS，将上层筛板置于层析柱顶部，小心向下推直到接触填料表面，压实。

 

筛板和填料层之间不要有气泡。

 

 

2. 平衡：向层析柱中加入10倍柱床体积的裂解液，（柱床体积2ml，加裂解液20ml）清洗柱子。

 

 

3. 上柱：将超声破碎上清加入层析柱。用离心管接住流穿液，反复上柱3次，使样本中的His-重组蛋白与纯化填料充分结合。

 

 

4. 洗涤：向层析柱中加入10倍柱床体积的洗涤液，清洗柱子，除去非特异性结合的杂蛋白。

 

 

5. 洗脱：向层析柱中加入10ml洗脱液，洗脱目的蛋白。用离心管接住流出的目的蛋白。

 

 

6. 再生：向层析柱中加入10倍柱床体积的裂解液，清洗柱子。加入10ml含20%乙醇的PBS，盖上上下盖，将层析柱直立放于4℃保存。