蛋白 AG 抗体纯化试剂盒
名称：蛋白AG 抗体纯化试剂盒
英文名称：PAG-agarose Antibody Purification Kit
目录号：QYP1055A (1ml) ，QYP1055B (6ml)， QYP1055C (12ml)
存条件：室温（15-25℃), 4℃
保质期：1 年
包含试剂：
试剂盒组成
试剂盒组成英文名称
QYP1055A (1ml)
QYP1055B (6ml)
QYP1055C (12ml)
PAG-琼脂糖凝胶预装柱
PAG-agarose Column
1ml
凝胶约0.5ml
6ml
凝胶约3ml
12ml
凝胶约6ml
抗体纯化平衡液
IgG Balance Buffer
20mL
100ml
200ml
抗体纯化洗涤液
IgG Wash Buffer
10ml
50ml
100ml
抗体纯化洗脱液
IgG Elution Buffer
10ml
50ml
100ml
抗体纯化中和液
IgG Neutralization Buffer
1ml
5ml
10ml
保存条件：PAG-琼脂糖凝胶预装柱4℃保存，其他组分室温保存。
产品介绍：
蛋白AG 抗体纯化试剂盒用于实验室的常规抗体亲和纯化操作（单抗、多抗）。每根柱子可至少反复使用9 次。含抗体（IgG）的样本（血清、腹水、细胞培养上清）流经PAG-琼脂糖凝胶柱，样本中的IgG 与PAG-琼脂糖凝胶特异性结合，非IgG组分则不与柱子结合。
PAG-琼脂糖凝胶是重组蛋白A 蛋白G 融合蛋白（PAG）与琼脂糖凝胶微球共价（Agarose）偶联，制备的抗体纯化（亲和层析）介质。蛋白 A/G 是一种基因工程蛋白，重组了蛋白 A 和蛋白 G 的 IgG 结合结构域。该融合蛋白在大肠杆菌中表达。蛋白A/G含有蛋白A的四个Fc结合结构域和蛋白G的两个Fc结合结构域，最终分子量为50KDa（SDS-PAGE中测得为40至45kDa）。蛋白 A/G 的 pH 值依赖性低于单独的蛋白 A，但具备蛋白 A 和 G 的累加特性。
与单独的蛋白A 或蛋白G 琼脂糖凝胶相比，本品具有更宽广的结合范围，可以与人类、小鼠、大鼠、兔等多物种各亚型IgG 结合。适用于抗体纯化，包括人类IgG, 小鼠IgG, 兔IgG 单抗和多抗的纯化和检测。PAG-琼脂糖凝胶结构稳定，结合IgG 效率高，对纯化体系pH 值要求不严格，允许在pH5.0-8.0 之间进行结合。
样本经洗涤液洗涤除杂后，加入洗脱液洗脱IgG，并用中和液调节pH 。本试剂盒内含1 根PAG-琼脂糖凝胶柱，每ml 凝胶可结合7-15mg 人类IgG 或4-8mg 小鼠IgG。
实验例
实验名称：PAG-agarose 抗体纯化试剂盒纯化抗体
试剂准备：
每1-2ml 血清或腹水采用1ml PAG-agarose 进行纯化。细胞上清中抗体浓度较低，建议盐析浓缩抗体，并使用PBS 透析之后再进行过柱纯化。
上柱之前，应尽可能使样本澄清。腹水中杂质较多，推荐在10000g，4℃离心20min ，弃去沉淀。用滤纸过滤，再用0.44um 滤器过滤，之后上柱。
如不过滤样本，直接上柱，样本中的杂质容易堵柱子，使实验时间延长，抗体纯度和产率降低。
实验方案
以1ml 血清使用1ml PAG-agarose 柱子纯化为例
1. 拔下PAG-琼脂糖凝胶柱上下盖，弃去柱内液体。
2. 用10ml 平衡液洗柱子。
3. 将预先处理过的血清上柱。用50ml 离心管接住血清上柱流穿液，重复上柱，共上柱3 次。
4. 用10ml 洗涤液洗柱子。
5. 取7 个1.5ml 离心管，每管加入100ul 中和液。
6. 加入10ml 洗脱液洗脱抗体。将样本收集到上述EP 管中，每管收集900ul ，总体积1ml。
7. 洗脱液自然流出后，用10ml 平衡液洗柱子。
8. 使用后的柱子应加入20%乙醇/PBS ，盖上上下盖，直立保存在4℃。
9. 洗脱下来的抗体，立刻使用PBS 在4℃透析。如不立刻进行透析，需-20℃冻存。请勿将抗体存放于洗脱液中长期保存在4℃。有部分抗体可能会产生沉淀。
10. 纯化好的抗体可用BCA 蛋白定量试剂盒和SDS-PAGE 电泳鉴定其浓度和纯度。
备注：应使用一根PAG-agarose 柱子纯化一种抗体，每根柱子可反复使用8-10 次。不建议使用同一根柱子纯化不同种类的抗体，以免抗体互相混淆，影响实验结果。通常情况下，1ml 小鼠腹水可获得4-8mg 鼠单抗，1ml 兔血清可获得5-10mg 兔多抗。
不同种属和指标的抗体，其产率和浓度不同。
（本版说明书，以上所述，指单次上柱的量。原版说明书中所述的1ml柱子可纯化10ml腹水，是指反复使用10次的结果，而非单次上柱的量。为提供产率，避免抗体浪费，1ml样本也可以多次上柱纯化）。
