蛋白 AG 抗体纯化试剂盒

 

名称：蛋白AG 抗体纯化试剂盒

 

英文名称：PAG-agarose Antibody Purification Kit

 

目录号：QYP1055A (1ml) ，QYP1055B (5ml)

 

保存条件：室温（15-25℃), 4℃

 

保质期：1 年 

 

包含试剂：

试剂盒组成	试剂盒组成英文名称	QYP1055A (1ml)	QYP1055B (5ml)
PAG-琼脂糖凝胶预装柱	PAG-agarose Column	1ml	1ml*5
抗体纯化平衡液	IgG Balance Buffer	20mL	100ml
抗体纯化洗涤液	IgG Wash Buffer	10ml	50ml
抗体纯化洗脱液	IgG Elution Buffer	10ml	50ml
抗体纯化中和液	IgG Neutralization Buffer	1ml	5ml

 

保存条件：PAG-琼脂糖凝胶预装柱4℃保存，其他组分室温保存。

 

 

产品介绍：

蛋白AG 抗体纯化试剂盒用于实验室的常规抗体纯化操作（单抗、多抗）。每根柱子可反复使用9 次。含抗体（IgG）的样本

（血清、腹水、细胞培养上清）流经PAG-琼脂糖凝胶柱，样本中的IgG 与PAG-琼脂糖凝胶特异性结合，非IgG组分则不与柱子结合。

样本经洗涤液洗涤除杂后，加入洗脱液洗脱IgG，并用中和液调节pH 。本试剂盒内含1 根(QYP1055A) ，5 根(QYP1055B) PAG-琼脂糖凝胶柱，

柱床体积为1ml ，可结合10-20mg 人类IgG 或6-8mg 小鼠IgG。

PAG-琼脂糖凝胶是重组蛋白A 蛋白G 融合蛋白（PAG）与琼脂糖凝胶微球（Agarose）偶联，制备的抗体纯化（亲和层析）介质。

与单独的蛋白A 或蛋白G 琼脂糖凝胶相比，本品具有更宽广的结合范围，可以与人类、小鼠、大鼠、兔等多物种各亚型IgG 结合。

适用于抗体纯化，包括人类IgG,  小鼠IgG,  兔IgG 单抗和多抗的纯化和检测。PAG-琼脂糖凝胶结构稳定，结合IgG 效率高，对纯化体系pH 值

要求不严格，允许在pH5.0-8.0 之间进行结合。

实验例

 

实验名称：PAG-agarose  抗体纯化试剂盒纯化抗体 

 

试剂准备：

每5-10ml 血清或腹水采用1ml PAG-agarose 进行纯化。细胞上清中抗体浓度较低，建议盐析浓缩抗体，并使用PBS 透析之后再进行过柱纯化。

 

上柱之前，应尽可能使样本澄清。腹水中杂质较多，推荐在10000g，4℃离心20min ，弃去沉淀。用滤纸过滤，再用0.44um 滤器过滤，之后上柱。

 

如不过滤样本，直接上柱，样本中的杂质容易堵柱子，使实验时间延长，抗体纯度和产率降低。

 

 

实验方案

 

以10ml 血清使用1ml PAG-agarose  柱子纯化为例

 

1.    拔下PAG-琼脂糖凝胶柱上下盖，弃去柱内液体。

 

2.    用10ml 平衡液洗柱子。

 

3.    将预先处理过的血清上柱。用50ml 离心管接住血清上柱流穿液，重复上柱，共上柱3 次。

 

4.    用10ml 洗涤液洗柱子。

 

5.    取7 个1.5ml 离心管，每管加入100ul  中和液。

 

6.    加入10ml 洗脱液洗脱抗体。将样本收集到上述EP 管中，每管收集900ul ，总体积1ml。

 

7.    洗脱液自然流出后，用10ml 平衡液洗柱子。

 

8.    使用后的柱子应加入20%乙醇/PBS ，盖上上下盖，直立保存在4℃。

 

9.    洗脱下来的抗体，立刻使用PBS 在4℃透析。如不立刻进行透析，需-20℃冻存。请勿将抗体存放于洗脱液中长期保存在4℃。

 

  有部分抗体可能会产生沉淀。

 

10.  纯化好的抗体可用BCA 蛋白定量试剂盒和SDS-PAGE 电泳鉴定其浓度和纯度。

 

 

备注：应使用每根PAG-agarose 柱子纯化一种抗体，每根柱子可反复使用8-10 次。不建议使用同一根柱子纯化不同种类的抗体，

 

以免抗体互相混淆，影响实验结果。通常情况下，10ml 小鼠腹水可获得5-15mg 鼠单抗，10ml 兔血清可获得10-20mg 兔多抗。

 

不同种属和指标的抗体，其产率和浓度不同。