产品介绍：
产品编号：QYM610
本产品包括 SDS-PAGE 凝胶制备所需全部试剂，只需自备蒸馏水，即可制备各种浓度的变性 PAGE 凝胶， 方便、快捷、安全、实惠。
本试剂盒在分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中均已加入 SDS，使用时无需额外加 入，分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液放置 2-8 ℃可能出现絮状，为 SDS 析出，常温放置一会溶液恢复澄清 后继续使用。
因为制备凝胶浓度不同，本品只给出规格仅为大概制胶数量。
产品组成： （含说明书 1 份）
组分
QYR6010-50T
QYR6010-100T
QYR6010-200T
保存条件
30% Acr-Bis（29:1）
100 mL
2×100mL
4*100ml
2-8 ℃
分离胶缓冲液
100 mL
2×100mL
4*100ml
RT
浓缩胶缓冲液
50 mL
100mL
2*100ml
RT
APS（过硫酸铵）
0.1 g×5
0.1 g×10
0.1 g×20
RT
TEMED
1 mL
1 mL×2
1 mL×4
RT& 避光
注意：过硫酸铵（APS）为结晶性粉末，2-8 ℃储存，使用前每支加入 1 mL 蒸馏水即为 10% APS 溶液， 现配现用最佳，溶液用后-20 ℃可储存 2 个月。APS 如出现严重结块，即已变质。
操作步骤：（以 0.75mm 厚 mini 胶为例）
一、灌制分离胶
1．参照凝胶模具说明书，装配好模具。
2．取相应体积的 30% Acr-Bis（29:1）、分离胶缓冲液和双蒸水（参照表 1）在小烧杯或试管中混合。
3．加入 10% APS 溶液和 TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4．注入模具（留少许以判断凝胶状态），避免产生气泡，凝胶混合液加至距前玻璃板顶端约 1.5 cm 或距梳齿 0.5 cm，轻轻加入 1 mL 水覆盖封胶，使分离胶表面保持平整。
5．静置 30-60 分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。
二、灌制浓缩胶
1．倒掉覆盖在分离胶上的水层。
2．将相应体积的 30% Acr-Bis（29:1）、浓缩胶缓冲液和双蒸水（参照表 2）在一个小烧杯或试管中混合。
3．加入 10% APS 和 TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
4．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面（留少许以判断凝胶状态），避免产生气泡，直至前玻璃板的顶端。
5．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
6．静置 10~20 分钟，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔。
7．进行常规电泳操作。
使用 Tris 甘氨酸电泳液建议电泳条件：
初始电压 80V，约 30 分钟，样品进入分离胶后，电压调至 120V，约 1 小时，样品抵达凝胶底部停止电泳。
注意事项：
1. APS 溶液常温不稳定，取用后立即放回-20 ℃冰箱；若发现凝胶时间延长，应更换 APS 溶液。
2. PAGE 凝胶的凝聚速度与温度以及 APS、TEMED 的用量密切相关；可通过增加 50%-100%的 APS 及 TEMED 的用量，加快 PAGE 凝胶的聚合速度，但凝胶聚合过快不利于操作。
3. 在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
4. 在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。
5. 丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿戴实验服和一次性手套。
附表 1. 配制 5 mL SDS-PAGE 分离胶（组份体积单位 mL）：
胶浓度
双蒸水
30% Acr-Bis（29:1）
分离胶缓冲液（4×
10%APS
TEMED
6%
2.75
1.0
1.25
0.05
0.004
8%
2.42
1.33
1.25
0.05
0.003
10%
2.08
1.67
1.25
0.05
0.002
12%
1.75
2.0
1.25
0.05
0.002
15%
1.25
2.5
1.25
0.05
0.002
附表2. 配制2 mL SDS-PAGE浓缩胶（组份体积单位mL）：
胶浓度
双蒸水
30%Acr-Bis(29:1)
浓缩胶缓冲液（4×）
10%APS
TEMED
5%
1.14
0.34
0.5
0.02
0.002
附表 3. SDS-PAGE 分离胶的浓度与最佳分离范围：
SDS-PAGE 分离胶浓度
分离范围
6%
50-150 kD
8%
30-90 kD
10%
20-80 kD
12%
12-60 kD
15%
10-40 kD
附表 4.常见问题与解决建议:
常见问题
建议
成胶速度慢或不成胶
增加 50-100%的 APS 用量，还不成胶需更换 APS。
浓缩胶与分离胶界面不齐
注入分离胶后需封胶，或检查模具是否漏液。
条带拖尾或有竖纹
蛋白样品需离心去除不溶物或透析除盐。
条带呈笑脸型
延长凝胶时间或适当降低电泳电压。
条带横向扩散
减少上样量。
