名称：蛋白A/G 琼脂糖凝胶（PAG-琼脂糖凝胶）
英文名称：Protein AG Agarose, PAG-agarose
目录号：QY2003
规格：2ml
储存形式：包含500ul PAG-琼脂糖凝胶和1.5ml 凝胶储存液
产品介绍
蛋白A/G 琼脂糖凝胶（PAG-琼脂糖凝胶）是重组蛋白A 蛋白G 融合蛋白（r-PAG）与琼脂糖凝胶微球（Agarose）偶联，制备的抗体纯化（亲和层析）介质。与单独的蛋白A 或蛋白G 琼脂糖凝胶相比，本品具有更宽广的结合范围，可以与人类、小鼠、大鼠、兔等多物种各亚型IgG 结合。本品适用于IP 实验及抗体纯化，包括人类IgG, 小鼠IgG, 兔IgG 单抗和多抗的纯化和检测。本品结构稳定，结合IgG 效率高，对纯化体系pH 值要求不严格，允许在pH5.0-8.0 之间进行结合。
产品性能
性能 指标
基质 6%琼脂糖微球
配基 蛋白 A 蛋白 G 融合蛋白
配基密度 ≥7mg PAG/ml 琼脂糖微球
载量 7-10mg IgG/ml 琼脂糖微球
粒径 45-165μm
推荐流速/最大流速 100/750 cm/h
pH 稳定范围-工作/清洗 3~9/2~10
储存缓冲液 PBS+20%乙醇
储存温度 4℃
保质期 1 年
实验例
实验名称：IP/免疫沉淀
试剂及耗材准备：
IP 缓冲液：25mMTris, 150mM NaCl, pH7.2
洗脱缓冲液：100mM Glycine, pH2.7
中和缓冲液：1MTris-HCl, pH9.0 细胞裂解液（抗原样本）
实验方案
本实验方案使用50ul PAG-琼脂糖凝胶（200ul PAG-琼脂糖凝胶混悬液），可结合25-250ug 抗体。具体操作中，可根据抗原、抗体的加样量及抗原与抗体的结合能力，调整所使用的PAG-琼脂糖凝胶混悬液、IP 缓冲液、洗脱缓冲液体积。
1. 在1.5ml 离心管中加入50-1000ul 抗原样本和一定浓度的抗体。4℃孵育过夜。
2. 在新的离心管中加入200ul PAG-琼脂糖凝胶混悬液，1000g ，4℃离心5min，弃上清。
3. 向PAG-琼脂糖凝胶中加入0.5ml IP 缓冲液，用上述条件离心，弃上清。重复2 次。
4. 将抗原-抗体复合物加入PAG-琼脂糖凝胶中，室温旋转孵育2h。
5. 将孵育好的琼脂糖凝胶-免疫复合物用上述条件离心，弃上清。
6. 加入0.5ml IP 缓冲液，用上述条件离心，弃上清。重复3-4 次。
7. 加入50ul 洗脱缓冲液，室温孵育5min。用上述条件离心，收集上清。重复1 次。
8. 合并两次离心收集的上清，加入10ul 中和缓冲液，将pH 调整至7.0 左右。
9. SDS-PAGE 电泳检测目的蛋白。或将目的蛋白进行透析、脱盐，供其他实验使用。
替代方案：用 0.5ml 蒸馏水洗涤琼脂糖凝胶-免疫复合物，用上述条件离心，弃上清。向琼脂糖凝胶-免疫复合物中加入蛋白上样缓冲液，95℃加热5min。离心收集上清，SDS-PAGE 电泳检测目的蛋白。
