名称：蛋白A/G 琼脂糖凝胶层析柱（PAG-琼脂糖凝胶层析柱）

英文名称：Protein AG Agarose Column

目录号：QYP1012

规格：1ml, 5ml

储存形式：预装柱

保护液：20%乙醇-PBS

储存温度：4℃

产品介绍

蛋白A/G 琼脂糖凝胶（PAG-琼脂糖凝胶）是重组蛋白A 蛋白G 融合蛋白（r-PAG）与琼脂糖凝胶微球（Agarose）偶联，制备的抗体纯化（亲和层析）介质。与单独的蛋白A 或蛋白G 琼脂糖凝胶相比，本品具有更宽广的结合范围，可以与人类、小鼠、大鼠、兔等多物种各亚型IgG 结合。本品适用于抗体纯化，包括人类IgG,  小鼠IgG,  兔IgG 单抗和多抗的纯化。本品结构稳定，结合IgG 效率高，对纯化体系pH值要求不严格，允许在pH5.0-8.0 之间进行结合。

产品性能

性能	指标
基质	6%琼脂糖微球
配基	蛋白 A/G 融合蛋白
配基密度	≥6mg PAG/ml  琼脂糖微球
载量	7-10mg IgG/ml  琼脂糖微球
粒径	45-165 μm
推荐流速/最大流速	100/750 cm/h
pH 稳定范围-工作/清洗	3~9/2~10
储存缓冲液	20%乙醇
储存温度	4℃
保质期	1 年

 

实验例  

实验名称：PAG-agarose  纯化抗体 

 

试剂及耗材准备：

平衡缓冲液：1×PBS, pH7.4

洗涤缓冲液：20mM Na2 HPO4, 150mM NaCl, 2mM EDTA, pH7.4

洗脱缓冲液：100mM Glycine, pH2.7

中和缓冲液：1MTris-HCl, pH9.0

每5-10ml 血清或腹水采用1ml PAG-agarose 进行纯化。细胞上清中抗体浓度较低，建议盐析浓缩抗体，并使用PBS 透析之后再进行过柱纯化。上柱之前，应尽可能使样本澄清。腹水中杂质较多，推荐在10000g，4℃离心20min ，弃去沉淀。用滤纸过滤，再用0.44um 滤器过滤，之后上柱。

如不过滤样本，直接上柱，样本中的杂质容易堵柱子，使实验时间延长，抗体纯度和产率降低。

实验方案

以10ml 血清使用1ml PAG-agarose  柱子纯化为例

1.  拔下PAG-琼脂糖凝胶柱上下盖，弃去柱内液体。

2.  用10ml 平衡液洗柱子。

3.  将预先处理过的血清上柱。用50ml 离心管接住血清上柱流穿液，重复上柱，共上柱3 次。

4.  用 10ml 洗涤液洗柱子。

5.  取7 个1.5ml 离心管，每管加入100ul 中和液。

6.  加入10ml 洗脱液洗脱抗体。将样本收集到上述EP 管中，每管收集900ul ，总体积1ml。

7.  洗脱液自然流出后，用10ml 平衡液洗柱子。

8.  使用后的柱子应加入20%乙醇/PBS，盖上上下盖，直立保存在4℃。

9.  洗脱下来的抗体，立刻使用PBS 在4℃透析。如不立刻进行透析，需-20℃冻存。请勿将抗体存放于洗脱液中长期保存在4℃。有部分抗体可能会产生沉淀。

10.  纯化好的抗体可用BCA 蛋白定量试剂盒和SDS-PAGE  电泳鉴定其浓度和纯度。

备注：应使用每根PAG-agarose 柱子纯化一种抗体，每根柱子可反复使用8-10 次。不建议使用同一根柱子纯化不同种类的抗体，以免抗体互相混淆，影响实验结果。通常情况下，10ml 小鼠腹水可获得5-15mg 鼠单抗，10ml 兔血清可获得10-20mg 兔多抗。不同种属和指标的抗体，其产率和浓度不同。