中文名称：细胞增殖/凋亡检测试剂盒

 

英文名称：Cell Counting Kit-8（CCK-8）

 

目录号：QYR018

 

规格：100 test（1ml）, 500 test（5ml）

 

保存条件：4℃，避光保存

 

保质期：1年

 

 

产品描述：

 

Cell Counting Kit-8，简称CCK-8试剂盒，是一种检测细胞增殖和细胞毒性的高灵敏度试剂盒。本试剂盒使用方便，易上手，细胞毒性极低。

 

本试剂盒广泛应用于药物活性评价、细胞毒性测定、细胞增殖等试验。

 

细胞线粒体内的一些脱氢酶能在电子偶联剂存在的条件下，能将水溶性的WST-8还原成橙黄色的formazan，生成的formazan的量与活细胞的

 

数量成正比。一般来说，细胞增殖越快，则颜色越深；若细胞毒性越大，细胞数量越少，则颜色越浅。同种细胞颜色的深浅与细胞数目呈线性关系。

 

 

细胞增殖/凋亡检测实验流程

 

细胞活性检测：

 

在96孔板中每孔加入100 μL的细胞悬液。(tip：孔板最外面一圈加入100 μL PBS溶液，以减少因培养液挥发引入的误差)

 

在37 ℃ 5%的CO2培养箱中预培养（tip：时间根据实验条件和需求而定，如6，12，24 h）。向每个细胞孔中加入10 μL的CCK-8试剂盒溶液。

 

（tip：加入时动作要轻，注意不要产生气泡，气泡会影响检测时的OD值）。将96孔板放到二氧化碳培养箱中孵育1-4小时。

 

（tip：孵育时间一般根据细胞的类型和细胞的密度有关，孔中细胞数量较多时一般控制在2小时内为宜，细胞数量较少时可适当延长至4小时。）

 

用酶标仪读取吸光度，检测波长为450 nm。

 

 

计算公式：

 

细胞存活率=[(At-Ab)/(Ac-Ab)]×100%

 

其中：

 

At：实验孔（含有细胞的培养液、CCK-8、待测物质或其它干预条件）

 

Ac：对照孔（含有细胞的培养液、CCK-8、未给予待测物质或其它干预条件）

 

Ab：空白孔（含有与实验孔相同体积的培养液、CCK-8，但不含细胞）

 

 

 

细胞增殖抑制或细胞毒性检测：

 

在96孔板中每孔加入100 μL的细胞悬液（tip：孔板最外面一圈加入100 μL PBS溶液，以减少因培养液挥发引入的误差）在37 ℃ 5%的

 

CO2培养箱中预培养（tip：培养时间根据实验设计而定，一般选择6，12或24小时）向检测细胞孔中加入等体积不同浓度的待测物质

 

（tip：加入体积一般不超过10 μL）。将培养板放入培养箱中培养一段时间（tip：培养时间根据实验设计而定，例如24，48 或72小时）。

 

向每个细胞孔中加入10 μL的CCK-8试剂盒溶液（tip：加入时动作要轻，注意不要产生气泡，气泡会影响检测时的OD值）。将96孔板放到

 

二氧化碳培养箱中孵育1-4小时。（tip：孵育时间一般根据细胞的类型和细胞的密度有关，孔中细胞数量较多时一般控制在1-2小时为宜，

 

细胞数量较少时可适当延长至3-4小时。）用酶标仪读取吸光度，检测波长为450 nm。

 

 

计算公式：

 

抑制率=[(Ac-At)/(Ac-Ab)]×100%

 

其中：

 

At： 实验孔（含有细胞的培养液、CCK-8、待测物质）

 

Ac：对照孔（含有细胞的培养液、CCK-8、未加待测物质）

 

Ab：空白孔（含有与实验孔相同体积的培养液、CCK-8，但不含细胞）