Bradford 法利用考马斯亮蓝 G-250 染料在酸性环境下与蛋白质发生结合反应的原理进行定量。游离态染料的最大吸收峰位于 465 nm，而与蛋白质结合形成复合物后，其最大吸收峰红移至 595 nm。在一定的浓度范围内，复合物在 595 nm 处的吸光度（A595）与蛋白质浓度呈良好的线性关系。该方法具有较高灵敏度，且受大部分小分子化学物质干扰较小（如可耐受 1 M 巯基乙醇或 5 mM 二硫苏糖醇）；但去垢剂对其影响较大，需严格控制样品中 SDS < 0.1%，Triton X-100 < 0.1%，Tween 20/60/80 < 0.06%。对于含有高浓度去垢剂的样品，建议改用启研生产的 BCA 蛋白浓度测定试剂盒。