一步法免疫染色封闭液

产品编号：​QYR1334

规格：​ 100mL

储存条件：​ 2-8°C 保存，有效期12个月。

本品是一种即用型、多功能免疫染色封闭液，专为细胞或组织切片的免疫荧光/免疫组化实验设计。本品在温和通透细胞结构的同时，高效阻断非特异性结合位点，可显著降低背景信号，适用于检测细胞浆、细胞器及细胞核内的各种靶蛋白。使用本品单次孵育即可同步实现细胞通透与封闭。

主要成分：

封闭基质：高纯度牛血清白蛋白

膜通透剂：Triton X-100

缓冲体系：磷酸盐缓冲液，pH7.4

稳定剂与防腐剂

实验方案（以免疫荧光为例）

样本固定与洗涤：

按标准流程完成细胞或切片的固定（如用4%多聚甲醛固定15分钟）。

用PBS（或含0.05% Tween-20的PBST）洗涤样本3次，每次5分钟，充分去除固定液。

封闭与通透（一步法）：

直接弃去洗涤液，无需晾干。

向样本上加入足量的本免疫染色封闭液，确保液体完全覆盖样品表面。

室温下，在水平摇床上孵育60分钟。对于背景较高的样品，可延长至90-120分钟，或于4°C孵育过夜。

后续操作：

孵育结束后，无需洗涤。可直接弃去封闭液，进行后续的一抗孵育步骤。

按照您的标准免疫染色流程，继续进行一抗、二抗孵育、DAPI复染及封片观察。

注意事项

保存与使用：本品含蛋白质，避免反复冻融或微生物污染。使用前请摇匀。

样本状态：请确保在加封闭液前，样本始终保持湿润，勿令其干燥，否则会导致高背景。

抗体稀释：强烈建议使用本封闭液来稀释您的一抗和二抗，这能获得最优的染色效果和最低的背景。

特殊抗原：对于某些位于细胞膜上且表位对去垢剂敏感的蛋白，本品的通透作用可能会影响抗原识别。建议先进行小规模测试，或参考相关文献调整方案。

高背景处理：若遇特殊样本导致背景过高，可尝试延长封闭时间，或在封闭液中额外添加与二抗同源的5%正常血清。

技术答疑

Q1: 封闭后需要洗涤吗？

A1:​ 不需要。弃去封闭液后，可直接加一抗。残留的封闭液有助于维持封闭效果并可作为抗体的稀释液。

Q2: 能用于Western Blot的膜封闭吗？

A2:​ 不能。本品含有膜通透剂Triton X-100，会破坏硝酸纤维素膜或PVDF膜的结构，导致破漏。Western Blot请使用专用的无去垢剂封闭液。

Q3: 可以检测细胞膜表面蛋白吗？

A3:​ 可以，但需注意。本品能有效封闭，但通透剂可能会部分影响膜蛋白的天然构象。若您的实验仅检测膜表面蛋白，推荐使用不含通透剂的专用封闭液，并在通透步骤前先进行表面抗原的染色。