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铜蓝蛋白Ceruloplasmin,Cp测定试剂盒--微量法
铜蓝蛋白Ceruloplasmin,Cp测定试剂盒--微量法
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铜蓝蛋白Ceruloplasmin,Cp测定试剂盒--微量法
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商品描述

商品属性

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

铜蓝蛋白是血浆的含铜蛋白,有运输铜的功能,同时具有氧化酶的活性,是细胞外液重要的抗氧化剂。

测定原理:

铜蓝蛋白催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺生成蓝色产物,在645nm处有特征吸收峰,依此可得铜蓝蛋白活性。

自备实验用品及仪器:

天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体7mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体15mL×1瓶,4℃避光保存。(使用前37℃预热)

样本前处理:

血清(浆)等液体样本:直接检测。

动植物组织样本:称取约0.1g组织,加入1mL蒸馏水,进行冰浴匀浆。10000g ,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定操作表:

分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至645nm,蒸馏水调零。

操作表

计算公式:

 

空白管

测定管

样品(µL)

30

30

试剂一(µL)

90

90

试剂二(µL)

60

 

混匀,37℃预热5min

试剂三(µL)

120

120

混匀,37℃反应30min

试剂二(µL)

 

60

混匀,25℃室温放置5min,取200µL于微量石英比色皿/96孔板中,测定645nm处吸光值。

ΔA=A测定-A空白。

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

按体积计算

酶活定义:37℃条件下, 每分钟每毫升样品与底物作用吸光度升高0.01为一个酶活单位。

Cp活力(U/mL)=ΔA×V反总÷0.01÷V样÷T = 33.33×ΔA

按鲜重计算

单位定义:37℃条件下,每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。

Cp活力(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷0.01÷(W×V样÷V样总)÷T = 33.33×ΔA÷W

按蛋白浓度计算

单位定义:37℃条件下,每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。

Cp活力(U/ mg prot)=ΔA×V反总÷0.01÷(Cpr×V样)÷T = 33.33×ΔA÷Cpr

V样:0.03 mL;V反总:0.3 mL;T:反应时间,30min;V样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

按体积计算

酶活定义:37℃条件下, 每分钟每毫升样品与底物作用吸光度升高0.005为一个酶活单位。

Cp活力(U/mL)=ΔA×V反总÷0.005÷V样÷T = 66.66×ΔA

按鲜重计算

单位定义:37℃条件下,每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.005为一个酶活单位。

Cp活力(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷0.005÷(W×V样÷V样总)÷T = 66.66×ΔA÷W

按蛋白浓度计算

单位定义:37℃条件下,每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高0.005为一个酶活单位。

Cp活力(U/ mg prot)=ΔA×V反总÷0.005÷(Cpr×V样)÷T = 66.66×ΔA÷Cpr

V样:0.03 mL;V反总:0.3 mL;T:反应时间,30min;V样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g

注意事项:

试剂二和试剂三有一定的毒性和刺激性,请操作时做好防护措施。

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