注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

氮素是构成生物体的一种必需元素，自然界中的氮素循环包括许多转化作用。空气中的氮气被固氮微生物及植物与微生物的共生体固定成氨态氮，经过硝化微生物的作用转化成硝态氮，后者被植物或微生物同化成有机氮化物，植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。

测定原理

α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应， 缩合生成蓝紫色物质，在580nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体9mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加1.5mL蒸馏水充分溶解。

试剂三：液体15mL×1瓶，4℃保存。

样本处理

按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，室温匀浆后于25℃，12000g离心10min，取上清待测。

测定操作表

	空白管	测定管
样本（μL）		60
蒸馏水（μL）	60
试剂一（μL）	90	90
试剂二（μL）	15	15
充分混匀，沸水浴5min后自然冷却10min
试剂三（μL）	150	150
充分混匀，取200μL于微量石英比色皿/96孔板中测定580nm处吸光值A，△A=A测定管-A空白管

注意：空白管只需测定一次。

计算公式

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.1535x-0.0279，R2=0.9993

NH4+—N含量（μg/g 鲜重）=（△A+0.0279）÷ 0.1535×V反总÷（W×V样÷V样总）

= 32.9×（△A+0.0279）÷W

V反总：反应总体积，0.315mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.06mL；V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g

用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0768x-0.0279，R2=0.9993

NH4+—N含量（μg/g 鲜重）=（△A+0.0279）÷ 0.0768×V反总÷（W×V样÷V样总）

= 65.8×（△A+0.0279）÷W

V反总：反应总体积，0.315mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.06mL；V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g

注意事项

提取好的待测液尽快测定，低温保存不得超过24小时。

沸水浴时间不宜过长，否则会对测定结果有影响。

显色后20min内完成测定。

最低检出限为18μg/g。