正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

果糖是一种最为常见的己酮糖，是葡萄糖的同分异构体，以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中，能与葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是最甜的单糖，广泛应用于食品、医药、保健品生产中。

测定原理：

果糖与间苯二酚反应，生成有色物质，在480nm下有特征吸收峰。

所需的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、蒸馏水

试剂的组成和配制：

提取液：液体 100ml×1瓶，4℃保存；

试剂一：1mg/mL标准液10mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体 25ml×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体 8ml×1瓶， 4℃避光保存；

试剂四：粉剂0.5g×1瓶，常温保存。

果糖提取：

称取0.1~0.2g样本，常温研碎；加入0.5mL提取液，适当研磨后快速转移到有盖离心管中；置于80℃水浴锅中10min（盖紧，以防止水分散失），振荡3~5次，冷却后，4000g，25℃离心10min，取上清；加入少量（约2mg）试剂四，80℃脱色30min（盖紧，以防止水分散失）；再加入0.5mL提取液，4000g，25℃离心10min，取上清液测定。

测定步骤

分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。

样本测定，（在EP管中依次加入下列试剂）：

混匀，95℃水浴反应30min（盖紧，以防止水分散失），冷却后取200μL至微量石英比色皿或96孔板中测定480nm处光吸收值，空白管、标准管和测定管分别记为A1、A2和A3。空白管和标准管只要做一管。

果糖含量计算：

试剂（μL）	空白管	标准管	测定管
样本			30
试剂一		30
蒸馏水	30
试剂二	210	210	210
试剂三	60	60	60

1、果糖含量(mg/mg prot）=（C标准管×V1）×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷（A2-A1) ÷Cpr

此法需要自行测定蛋白浓度。

2、果糖含量(mg/g鲜重)=(C标准管×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(W×V1÷V2)= (A3-A1) ÷(A2-A1) ÷W。

C标准管：标准管浓度，1mg/mL；V1：加入样本体积，0.03mL；V2：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。

注意：最低检测限为100ng/g鲜重或1ng/mg prot