注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
锰过氧化物酶(EC1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、DTT,多环芳烃等。
测定原理
锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在465nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、震荡仪、甲苯。
试剂组成和配制
试剂一:液体12mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体2mL×1支,4℃保存。
试剂三:液体4mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体2mL×1支,4℃保存。
样品处理
新鲜土样风干,过30-50目筛。
测定操作
对照管
测定管
土样(mg)
40
40
甲苯(μL)
30
30
25℃,静置15min
试剂一(μL)
140
120
试剂二(μL)
20
试剂三(μL)
40
40
试剂四(μL)
20
20
充分混匀,于30℃震荡反应3h,于10000rpm,4℃离心10min,取150μL于微量石英比色皿/96孔板,测定465nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,△A=A测定管- A对照管
酶活计算公式
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
酶活性定义:每克土壤每天氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
S-MnP活性(nmol/d /g 土样)= ×V反总÷W÷T= 66.4×△A÷W
ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,0.2mL;W:样本质量,g;T:反应时间,3h
用96孔板测定的计算公式如下
酶活性定义:每克土壤每天氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
S-MnP活性(nmol/d /g土样)= ×V反总÷W÷T= 132.8×△A÷W
ε:愈创木酚摩尔消光系数:12100L/mol/cm;d:比色皿光径,0.5cm;V反总:反应总体积,0.2mL;W:样本质量,g;T:反应时间,3h