正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。S-ACPT在酸性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

测定原理：

酸性条件下，S-ACPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。

所需仪器及设备：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板、双蒸水

试剂组成和配置：

液体一：1mL×1支，4℃保存。

液体二：0.5mL×1支，4℃保存。

试剂一的配制：临用前按液体一：液体二：蒸馏水=140（μL）：20（μL）：21（mL）的比例配制，现配现用，如出现白色絮状沉淀则不能用。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入6ml蒸馏水充分溶解；用不完的试剂4℃保存；

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入2mL试剂七，沸水浴加热溶解，然后加入8ml试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂4℃保存；

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入30ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；

试剂五：液体8mL×1瓶，4℃保存；

试剂六：液体1.5mL×1支，0.05mg/ml标准酪氨酸溶液，4℃保存；

试剂七：液体5mL×1支，4℃保存；

样品处理：

新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

测定操作：

试剂一的配制：见试剂的组成和配制。

2、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

3、样本测定：

混匀，40℃水浴30min，振荡5-6次，使土样与反应液充分接触

试剂名称	测定管	对照管
风干土样（g）	0.02	0.02
试剂一（μL）		150
试剂三（μL）	150

试剂二（μL）

50

50

	测定管	对照管	标准管
上清液（μL）	60	60
试剂六（μL）			60
试剂四（μL）	280	280	280
试剂五（μL）	60	60	60

混匀，8000g25℃离心10min，取上清液，在EP管或96孔板中加入下列试剂

混匀，40℃水浴20min，8000g 25℃离心10min，取上清液200μL，680nm下读取各管吸光值A

注意：标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

S-ACPT活性计算：

单位定义：每天每g土样中产生1mg酪氨酸为一个 S-ACPT活力单位。

S-ACPT(mg/d/g土样)=C标准×(A测定管-A对照管)÷A标准管×V反总÷W÷T=24×(A测定管-A对照管)÷A标准管

C标准管：标准管浓度，0.05mg/mL；V反总：反应体系总体积，0.2mL；T：反应时间，30min=1/48d； W：样本质量，0.02g。