正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

S-UE能够水解尿素，产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。

测定原理：

利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：甲苯2mL×1瓶，4℃保存；（自备）

试剂二：粉剂×1瓶，临用前加入9mL蒸馏水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的试剂4℃保存；

试剂三：液体22mL×1瓶，4℃保存；

试剂四A液：液体×1支，4℃保存；试剂四B液：液体×1瓶，4℃保存；临用前将A液倒入B液中混合，待用；用不完的试剂4℃保存一周；

试剂五：液体2mL×1瓶，4℃保存；

样品处理：

新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

测定步骤：

1 、培养

	测定管	对照管
风干土样(g)	0.05	0.05
试剂一（μL）	20	20

振荡混匀，室温放置15min

混匀，放入37℃水浴培养24h后，10000g 25℃离心10min，取上清液。

试剂二（μL）	90
蒸馏水（μL）		90
试剂三（μL）	190	190

2、将培养结束的上清液稀释10倍（取0.1mL上清液，加入0.9mL蒸馏水）。

3、测氨量（在微量石英比色皿或96孔板中加入下列试剂）

	测定管	对照管
稀释后的上清液（μL）	80	80
试剂四（μL）	15	15
试剂五（μL）	15	15

蒸馏水（μL）

90

90

充分混匀，室温放置20min

混匀，于578nm处，蒸馏水调零，读吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

脲酶活力计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0915x +0.0373；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值A。

单位的定义：每天每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

脲酶活力（μg/d/g 土样）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷W÷T =656×(ΔA -0.0373)

10：稀释倍数；T：反应时间，1d； V反总：反应体系总体积：0.3mL；W：样本质量，0.05g。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.04575x +0.0373；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值A。

单位的定义：每天每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

脲酶活力（μg/d /g 土样）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反总÷W÷T =1312×(ΔA -0.0373)

10：稀释倍数；T：反应时间，1d； V反总：反应体系总体积：0.3mL；W：样本质量，0.05g。