注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

LPS又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS广泛的存在于各种生物中。

测定原理：

LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。

自备仪器和用品：

研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、甲苯80mL、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体65mL×2瓶，4℃保存。

试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡20min。

试剂三：甲苯80mL×1瓶，4℃保存（自备）。

试剂四：液体10mL×1瓶，4℃保存。

标准品：液体10 μL×1瓶，10 µmol/mL的标准溶液，4℃保存。临用前加入3.168 mL甲苯，充分溶解。

样本处理

建议称取约0.1g土样，加入1mL试剂一进行冰浴匀浆，再用回旋式振荡器振荡提取15min，4℃，4000g离心10min，取上清待测。

S-LPS测定操作：

分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到710 nm，蒸馏水调零。

试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min。

在1.5mL EP管中依次加入下列试剂

37℃振荡反应10 min

试剂名称（μL）	空白管	测定管
蒸馏水	150
样本		50
试剂一	300	300
试剂二		100

试剂三

800

800

试剂名称（μL）	空白管	测定管	标准管
上清液	400	400
标准品			400
试剂四	100	100	100

37℃振荡反应10 min后，8000g，25℃，离心10min，取上清液

37℃振荡反应5 min后，静置5min，取200μL上层液加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm处测定吸光值。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

S-LPS活性计算公式：

活性单位定义：37℃中每克土样每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

S-LPS (μmol/min/g 土样) = [C标准品×(A测定管-A空白管)÷（A标准管- A空白管）]×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T

=16×[(A测定管－A空白管)÷（A标准管- A空白管）]÷W

C标准品：10 µmol/mL；V反总：反应总体积，0.8mL；V样：反应中加入样本体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL； W：样本质量，g；T：催化反应时间，10 min。