正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

S-NR催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐，是土壤硝态氮还原的关键酶。研究S-NR的活性对合理施肥，降低氮素的损失具有重要意义。

测定原理

S-NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋ +H 2 O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰，可用分光光度法测定。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂的组成和配制

试剂一：液体12mL×1瓶，-20℃保存。

试剂二：液体8mL×1瓶，-20℃保存。

试剂三：液体9mL×1瓶，4℃保存（如出现结晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）。

试剂四：液体9mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：标准品储备液1mL，-20℃保存。

0.1μmol/mL标准液的配制：用时将试剂五稀释100倍，即取 0.1ml 加蒸馏水定容至 10ml。

样品处理：

新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

试剂名称	1mL带盖离心管
	测定管	对照管	标准管	空白管
风干土样（g）	0.06	0.06
0.1μmol/mL标准液（μL）			60
蒸馏水（μL）		225		285
试剂一（μL）	225		225
试剂二（μL）	75	75	75	75

上清液（μL）	130	130	130	130
试剂三（μL）	85	85	85	85
试剂四（μL）	85	85	85	85

混匀后，盖盖后37℃水浴24h，8000g 25℃离心10min，取上清液

混匀，25℃显色20min，4000g，25℃离心10min，取200uL上清液至微量石英比色皿或96孔板中，540nm下读取各管吸光值。标准管和空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

注意点：

务必先做2个样本的预测定，少部分土壤由于样本特殊性可能出现测定管小于对照管，请及时与我司技术支持联系，以获得针对样本特殊性的调整测定方法。

S-NR活性计算：

单位的定义：每天每g土样中产生1μmol NO2ˉ的量为一个 S-NR活力单位。

S-NR（μmol /d/g土样）=C标准×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）×V反总÷W÷T =0.5×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）

C标准管：标准管浓度，0.1μmol/mL；V反总：反应体系总体积，0.3mL；T：反应时间，24h； W：样本质量，0.06g。