注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

土壤中有效硼直接影响着植物的吸收和利用。

测定原理

硼与甲亚胺在弱酸条件下形成棕黄色配合物，在420nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、常温离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

试剂组成和配制

试剂一：液体5mL×1支，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加8mL蒸馏水溶解，加0.125mL乙酸。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加4mL蒸馏水溶解。

样本处理

新鲜土样风干，过100目筛，按照土壤质量（g）：蒸馏水体积（mL）为1：2的比例（建议称取约0.5g土样，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，沸水中浸提10min，待自然冷却，加入50μL试剂一，震荡5min，8000g ，25℃离心10min，取上清液待测。

测定操作表

	空白管	测定管
样本（μL）		40
试剂二（μL）	80	80
试剂三（μL）	40	40
H2O（μL）	80	40
充分混匀，25℃黑暗中静置1h
于微量石英比色皿/96孔板，蒸馏水调零，测定420nm处吸光值A，分别记为A空白管和A测定管，△A=A测定管-A空白管

计算公式

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.3897x - 0.021，R² = 0.9995

全硼含量（mg/kg）=（△A+0.021）÷ 0.3897÷（W÷V样总）

= 2.56×（△A+0.021）÷W

V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g

用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.1949x - 0.021，R² = 0.9995

有效硼含量（mg/kg）=（△A+0.021）÷ 0.1949÷（W÷V样总）

=5.13×（△A+0.021）÷W

V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g

注意事项

配制好的试剂二4℃保存不可超过7天。

显色时严格控制温度并且避光，以免显色剂见光分解。