注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

铜蓝蛋白是血浆的含铜蛋白，有运输铜的功能，同时具有氧化酶的活性，是细胞外液重要的抗氧化剂。

测定原理

铜蓝蛋白催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺生成蓝色产物，在645nm处有特征吸收峰，依此可得铜蓝蛋白活性。

自备实验用品及仪器

天平、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

试剂一：液体15mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体20mL×1瓶，4℃避光保存。（使用前37℃预热）

测定操作表

血清（浆）等液体样本：直接检测。

动植物组织样本：称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水，进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

	空白管	测定管
样品（µL）	100	100
试剂一（µL）	300	300
试剂二（µL）	200
混匀，37℃预热5min
试剂三（µL）	400	400
混匀，37℃反应30min
试剂二（µL）		200
混匀，25℃放置5min，1 mL玻璃比色皿,空白管调零，测定OD645

计算公式

按体积计算

单位定义：37℃条件下，每分钟每毫升样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。

Cp活力（U/mL）=×V反总÷V样÷T=33.33×OD645

按鲜重计算

单位定义：37℃条件下，每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。

Cp活力（U/g鲜重）=×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T=33.33×OD645÷W

按蛋白浓度计算

单位定义：37℃条件下，每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。

Cp活力（U/mg prot）=×V反总÷（Cpr×V样）÷T=33.33×OD645÷Cpr

V样：0.1 mL；V反总：1 mL；T：反应时间，30min；V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

注意事项

试剂二和试剂三有一定的毒性和刺激性，请操作时做好防护措施。