正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

PAL（EC4. 3 1 5）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。

测定原理

PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。

所需的仪器和用品

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×3瓶，4℃保存。临用前每瓶加入4mL蒸馏水水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；

试剂三：液体2.5mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

试剂名称（μL）	测定管	对照管
样本	20
试剂一	780	800
试剂二	200	200

试剂三

40

40

混匀，30℃ 准确水浴30min

混匀，静置10min后，290nm处记录测定管吸光值A1和对照管吸光值A2，△A=A1-A2。

注意：对照管只要做一管

PAL活性计算

按蛋白浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.1为一个酶活性单位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V反总÷（Cpr× V样）÷0.1÷T =17.3×ΔA÷Cpr

按样本鲜重计算

单位定义：每g组织每mL反应体系中每min使290nm下吸光值变化0.1为一个酶活性单位。

PAL（U/g鲜重）＝ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷W

V反总：反应体系总体积，1.04mL； V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；