注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

土壤脱氢酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤体系内活性微生物量以及其对有机物的降解活性，可以作为土壤微生物的降解性能指标。

测定原理

氢受体2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC）在细胞呼吸过程中接受氢以后，被还原为三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），在波长485nm处有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm测定其吸光值，即得土壤脱氢酶活性。

自备实验仪器及用品

筛子、天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、可见分光光度计、玻璃比色皿，冰、蒸馏水、甲醇（不允许快递，请用户自备）。

试剂的组成和配制

试剂一：粉剂×1瓶，使用前加10mL试剂二溶解，4℃避光保存（尽量现配现用）。

试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：甲醇，自备。

样品处理

胞外酶：取1mL样本，8000g 25℃离心10min，取上清液测定。

胞内酶: 取1mL样本，8000g 25℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1mL蒸馏水，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），8000g 25℃离心10min，取上清液测定。

测定步骤和操作表

脱氢酶活力计算

标准曲线：y = 0.0422x - 0.0312；R2 = 0.9988；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。

按样本体积计算

	空白管	测定管
样品（μL）		100
蒸馏水（μL）	100
试剂一（μL）		200
试剂二（μL）	200
充分混匀，37℃培养24h
试剂三（μL）	1800	1800
振荡1h，8000g， 25℃，离心5min，取上清1mL于1mL玻璃比色皿，测定A485，△A=A测定-A空白。空白管只要做一管。

酶活单位定义：在37℃时，每mL样品每天催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

sDHA（μg/ d /mL）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V反总÷V样÷T=497.63×（△A+0.0312）

按样本蛋白浓度计算

酶活单位定义：在37℃时，每mg蛋白样品每天催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

sDHA（μg/ d / mg prot）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V反总÷V样÷T÷Cpr = 497.63×（△A+0.0312）÷Cpr

V反总：反应总体积，2.1mL；T：培养时间，1d；V样：样本体积，0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。

注意事项

配制好的试剂一避光保存于4℃，最好在一周内使用，若出现红色，则不能使用。