注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

亚硝酸盐广泛存在于水体和土壤中，不仅是有机氮分解的重要中间产物，也可能来自污染。人体摄入过量后，可诱发消化系统癌变。

测定原理

在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物，再与N-1-萘基乙二胺形成紫红色偶氮化合物，在540nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、常温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体100mL×1瓶，室温保存。

试剂一：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。

样品处理

土壤样品：准确称取过筛后的土壤约1g，加入2 mL 提取液，室温震荡1h，8000g，25℃离心15min，静置，待其分层后，取上清液待测。

水样：直接检测；如果浑浊，可以离心后再测定。

测定步骤和操作表

	空白管	测定管
样品（µL）		1000
试剂一（µL）	500	500
试剂二（µL）	500	500
H2O	1000
混匀，25℃静置15min，1mL玻璃比色皿，空白管调零，测定A540

注意：空白管只需测定一次。

亚硝酸盐含量计算

标准曲线回归方程为：y= 0.011x + 0.0216，R2= 0. 9991

（1）土壤样品：NO2-（μmoL/g）=（A540测定管 -0.0216）÷0.011×V反总÷(V样÷V样总×W)×10-3=×（A540测定管 - 0.0216）÷W

（2）水样：NO2-（μmoL /mL）=（A540测定管 -0.0216）÷0.011×V反总÷V样×10-3

=×（A540测定管 - 0.0216）

V样总：加入提取液体积，2mL；V反总：反应总体积，2 mL；V样：反应中样品体积，1mL； W：样品质量，g

注意事项

试剂盒2-8℃保存。

试剂对人体有一定的危害，请穿实验服，戴手套操作。

最低检出限为1.97μmoL /L。