注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
木质素过氧化物酶(EC1.11.1.14)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,属于木质素降解酶系,在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。
测定原理
木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛,在310nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿、震荡仪、甲苯。
试剂组成和配制
试剂一:液体25mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体25mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存。
样品处理
新鲜土样风干,过30-50目筛。
测定操(在2mL EP管中依次加入下列试剂)
对照管
测定管
土样(g)
0.1
0.1
甲苯(μL)
50
50
25℃静置15min
试剂一(μL)
750
蒸馏水(μL)
750
试剂二(μL)
450
450
试剂三(μL)
300
300
30℃震荡反应3h,冰浴5min,12000g,4℃离心10min,取上清800μL,于1mL石英比色皿,测定310nm处吸光值,分别记为A对照和A测定,△A=A测定- A对照
酶活计算公式
酶活性定义:每克土壤每天氧化1nmol藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。
S-LiP活性(nmol/d/g 土样)= ×V反总÷W÷T= 1290×△A÷W
ε:藜芦醛摩尔消光系数:9300L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,1.5mL; W:样本质量,g;T:反应时间,3h