正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
叶绿体是植物细胞内最重要、最普遍的质体,它是进行光合作用的细胞器。叶绿体利用其叶绿素将光能转变为化学能,把CO2与水转变为糖。叶绿体是世界上成本最低、创造物质财富最多的生物工厂,准确和全面分离保持正常活性的叶绿体已经成为许多研究的前提。
测定原理
利用专门试剂温和匀浆组织或细胞,再采用差速离心法从匀浆中分离完整叶绿体,可以得到保持活性的叶绿体酶。
需自备的仪器和用品
台式离心机、可调式移液器、匀浆器/研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
试剂一:液体100mL×1瓶,-20℃保存;
样本的前处理:
称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一,用冰浴匀浆器或研钵匀浆,很快研磨或捣碎,30秒内完成,使之成为匀浆液。
将匀浆液于200g(离心率),4℃离心1min。
弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,1500g,4℃离心5min。
弃上清液,于沉淀中加入0.5mL试剂一混匀配成叶绿体悬浮液。混匀后测定叶绿体酶活性。