正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理

碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将Cu2+还原成Cu+；2分子的BCA与Cu+结合，生成紫色络合物，在540-595nm有吸收峰，562nm处吸收峰最强。

自备仪器和用品

台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

试剂A：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂B：液体1.2mL×1支，4℃保存。

标准蛋白：液体2 mL×1支，4℃保存。

工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×1 mL），将试剂A和B按照50：1的比例混合，盖紧后充分混匀。

样品中可溶性蛋白质提取

液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。

组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水）

冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即待测液。

3. 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

测定操作

1. 分光光度计预热30min，调节波长到562 nm，蒸馏水调零。

2. 工作液置于60℃水浴预热30 min。

	空白管	标准管	测定管
蒸馏水（μL）	20
标准品（μL）		20
待测液（μL）			20
工作液（μL）	1000	1000	1000
混匀后置于60℃保温30min，于1mL比色皿在562nm处测定吸光值A，分别记为A空白管、A标准管、A测定。

注意：空白管和标准管只需要做一次。

计算公式

Cpr (mg/mL) = C标准品×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）

= 0.5×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）

Cpr (mg/g)= C标准品×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）÷ W

= 0.5×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）÷ W

W: 样本质量，g

注意事项

BCA法蛋白含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在20-5000μg/ml样品。测定前取1-2个样做预实验，若A测定管－A空白管﹥1.5，需将样本用提取液稀释后再测定，以确保测定的准确性。