中文名:X-α-gal
英文名:X-α-galCAS:107021-38-5级别:试剂级别分子量:408.64分子式:C14H15BrCNO6纯度:N/A储存条件:-20℃
产品简介
中文别名:5-溴-4-氯-3-吲哚基-alpha-D-吡喃半乳糖苷
英文别名:X-α-Gal, X-alpha-Gal, 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-α-D-galactoside
溶 解 性:溶于二甲基甲酰胺(DMF)、甲醇;1%甲醇溶液无色,清澈
关于X-α-gal:
X-α-gal是酵母半乳糖苷酶(MEL1)的显色底物,MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,该基因受GAL4调控。MEL1编码的分泌型的α-半乳糖苷酶可水解无色的X-α-gal,形成蓝色产物。MEL1基因激活后,X-α-gal检测阳性克隆表达的α-半乳糖苷酶,阳性克隆直接在含有X-α-gal的固体培养基上呈蓝色。因此无需裂解细胞,费时费力的检测β-半乳糖苷酶报告基因,只需通过蓝白颜色筛选,即可快速和简便地识别阳性克隆。
X-α-Gal的用途:
1. 用于筛选含X-α-半乳糖苷酶基因的阳性酵母或细菌菌株。在固体培养基上直接检测酵母双杂交相互作用。
2. 用于区分肠杆菌科内的不同菌种,以及区分双歧杆菌和乳酸菌;
3. 在组织化学中用于酶活性的检测;
X-α-Gal的使用方法:
一、涂布于预制平板:
1.储存液配制:溶解24 mg X-α-gal于6 mL DMF,终浓度为4 mg/mL。
2. 涂布200ul(15cm) 或者100ul(10cm)X-α-gal储存液于预制平板上;
3. 置于37℃培养箱至液体被吸收(DMF挥发性低,最长可放4小时);
4. 将转化细菌或酵母涂于平板上,于37℃或30℃培养直至蓝色菌斑出现。
二、直接加入培养基中:
1. 储存液配制:溶解60 mg X-α-gal于3 mL DMF,终浓度为20 mg/mL。
2. 将已灭菌固体培养基冷却至50-55 ℃;
3. 加入2-10 ml X-α-Gal储存液,混匀,快速倒平板。
携带MEL1基因的酵母菌株:
Y2HGold、Y190、AH190、Y187、PG69-2A
X-Gal与X-α-gal不同:
X-Gal是E.coli β-半乳糖苷酶(LacZ)的反应底物,而X-α-gal是酵母α-半乳糖苷酶(MEL1)的反应底物。X-α-gal用作酵母双杂交系统中蓝白筛选的筛选标记。