pDC315 载体

质粒类型:    腺病毒载体

高拷贝/低拷贝:    低拷贝

启动子:    MCMV

克隆方法:    多克隆位点，限制性内切酶

载体大小:    3913 bp 

5' 测序引物及序列:    pDC315F: acg tgg gta taa gag gcg

3' 测序引物及序列:    pDC315R: cga tgc tag acg atc cag

载体抗性:    Ampicillin (氨苄青霉素)

备注:    pDC315和pDC316的区别在于多克隆位点的差异

 

pDC315 含有以下元件：

 

Ampr: 为质粒在E.coli（如DH5α）中扩增提供氨苄抗性（终浓度100μg/ml）。

ori：质粒在E.coli 中的复制起点。

Ad：Ad 序列，主要由Ad 可以与Ad 基因组质粒发生同源重组。

ITR：Ad 反向末端重复序列，是Ad 基因组的包装识别信号。

MCMV：来自小鼠CMV 病毒的启动子。

SV40 polyA：来自SV40 病毒T 抗原的mRNA 加尾信号。

loxP：真核重组酶（Cre）的重组识别序列。

通过pDC315 构建重组腺病毒的用户须知

 

为了确保病毒包装的目的基因能够正确表达，用户需对自己构建的带有目的基因的pDC315 进行酶切鉴定，并建议进行测序验证，保证克隆的基因正确。

由于pDC315 本身是一种真核表达载体，转染细胞即可介导目的基因的表达，因此建议有条件的用户在完成质粒构建后，将其转染细胞，通过ELISA、免疫组化或Western 的方法来检测目的基因的表达，以及检测目的基因表达后的生理活性。这样可以进一步增加实验成功的把握。