中文名:Schiff试剂/希夫试剂
英文名:Schiff solution staining solution
储存条件:2-8℃
自备材料:
1、10%福尔马林固定液
2、蒸馏水
3、过碘酸溶液
4、苏木素染色液
5、酸性乙醇分化液
6、系列乙醇
操作步骤(仅供参考):
1、常规固定,常采用 10%的福尔马林,常规脱水包埋。
2、石蜡切片脱蜡入蒸馏水;冰冻切片直接入蒸馏水。
3、自来水冲洗 2~3min,再用蒸馏水浸洗 2 次。
4、切片入过碘酸溶液,室温放置 5~8min,一般不宜超过 10min。
5、自来水冲洗 1 次,再用蒸馏水浸洗 2 次。
6、切片入 Schiff Reagent,室温阴暗处浸染 10~20min。
7、自来水冲洗 10min。
染色结果:PAS 反应阳性物质(糖原或多糖)呈红色或紫红色。
阴性对照(可选):
1、取淀粉酶 1g 溶解于 PBS(pH5.3) 100ml,处理 30~60min,与其他切片共同入过碘酸溶液,结果应为阴性。
2、(备选方案)取唾液片(过滤后用)处理 30~60min,与其他切片共同入过碘酸溶液,结果应为阴性。
3、(备选方案)如果对照片采用其自身样本,对照片不经过碘酸溶液这一步,直接入 Schiff Reagent。结果应为阴性。
注意事项:
1、Schiff Reagent 应置于 4℃密闭保存,使用时避免接触过多阳光和空气。在室温过低(小于 15℃)情况下反应缓慢,可以置于适宜温水(小<30℃)中恢复后再使用。
2、理想的 Schiff Reagent 接近于无色,如果试剂颜色呈极轻微粉红色亦可考虑使用。如试剂颜色呈明显的红色应弃用。
3、颜色深浅很大程度上取决于样品在过碘酸溶液和 Schiff Reagent 中作用时间的长短。
4、请穿实验服并戴一次性手套操作。