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His-标签蛋白纯化(Ni-NTA柱法)试剂盒(变性)His-labeled protein Purification NI-NTA column kit Denaturing
His-标签蛋白纯化(Ni-NTA柱法)试剂盒(变性)His-labeled protein Purification NI-NTA column kit Denaturing
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His-标签蛋白纯化(Ni-NTA柱法)试剂盒(变性)His-labeled protein Purification NI-NTA column kit Denaturing
市场价格
经销商客户: ¥247.5
实验室客户: ¥337.5
近期销售量11 用户评价:comment rank 5()
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商品描述

商品属性

His-标签蛋白纯化(Ni-NTA柱法)试剂盒(变性)

名称:Ni-NTA蛋白纯化试剂盒变性

英文名称:Ni-NTA Protein Purification Kit (Denaturing)

目录号:QYP1063

保存条件:室温(15-25℃),4

保质期:1

包含试剂:

名称

英文名称

规格

规格

保存条件

Ni-NTA琼脂糖凝胶预装柱

Ni-NTA agarose column

1ml

5ml

4

变性裂解液

Denature Lysis Buffer

10ml

50ml

室温

变性平衡液

DenatureBalance Buffer

20ml

100ml

室温

变性洗涤液

DenatureWash Buffer

10ml

50ml

室温

变性洗脱液

DenatureElution Buffer

10ml

50ml

室温

 

产品介绍

试剂盒1ml 包括11ml Ni-NTA琼脂糖凝胶预装柱。

试剂盒5ml 包括1 6ml Ni-NTA琼脂糖凝胶预装柱。

Ni-NTA蛋白纯化试剂盒变性用于实验室的His标签融合蛋白包涵体表达纯化。表达菌株经IPTG诱导表达蛋白、超声破碎、离心分离后的沉淀,使用8M尿素溶解,流经Ni-NTA琼脂糖凝胶柱,样本中的His标签蛋白与Ni-NTA琼脂糖凝胶特异性结合,其他杂蛋白则不与柱子结合。样本经变性洗涤液洗涤除杂后,加入变性洗脱液,洗脱His标签蛋白。装柱后每根凝胶柱柱床体积为1ml可特异性结合5-10mgHis标签蛋白单次蛋白纯化得率因蛋白种类、蛋白分子量大小而异。包涵体表达蛋白与Ni-NTA琼脂糖凝胶柱的结合率略低于上清表达蛋白。每根Ni-NTA琼脂糖凝胶柱可反复使用8-10次,其His标签蛋白结合效率不会显著降低。

如需进行可溶性蛋白纯化,请购买Ni-NTA蛋白纯化试剂盒(非变性)(QYP1062)。如需要本试剂盒纯化试剂补充装请购买Ni-NTA蛋白纯化试剂盒变性(补充装)(QYP1065)。

 

 

实验例:

实验名称:His-标签蛋白的过柱纯化(变性)

1.溶解:将含有目的蛋白的样本(超声破碎沉淀)以1/10体积重悬于变性裂解液中(例:100ml菌体收获的沉淀使用10ml变性裂解液重悬),在旋转摇床上室温溶解1h-2h,大部分沉淀应溶解。

2.离心:将溶解的样本10000g室温离心10min收上清。

3. 装柱:将Ni-NTA蛋白纯化填料混匀。将下层筛板置于层析柱空柱底部。用剪开枪头尖的1ml枪头吸取2mlNi-NTA凝胶混悬液,加入层析柱空柱。待液体流出后(柱床体积1ml),向层析柱中加入PBS将上层筛板置于层析柱顶部,小心向下推直到接触凝胶表面,压实。筛板和凝胶层之间不要有气泡。

备注如试剂盒中是Ni-NTA蛋白纯化预装柱无需进行装柱

4.平衡:用10ml变性平衡液洗柱子

5. 上柱:将步骤2所得上清加入层析柱。接住流穿液,反复上柱3次,使His标签蛋白与Ni-NTA填料充分结合。

6. 洗涤:10ml变性洗涤液洗柱子

7. 洗脱:7ml洗脱液洗脱目的蛋白。将样本收集到1.5ml EP管中,每管1ml

8. 再生:10ml变性平衡液洗柱子。

9. 保存:使用后的柱子应加入20%乙醇-PBS,盖上上下盖,直立保存在4℃。

10. 洗脱下来的蛋白可用BCA蛋白定量试剂盒和SDS-PAGE电泳鉴定其浓度和纯度。

 

实验结果举例:

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