SiRNA纳米转染试剂
名称: SiRNA纳米转染试剂
英文名称: SiRNA EasyTrans Reagent
目录号: QYR103
产品内容
货号
规格
QYR0103-1
0.5ml
QYR0103-2
1.0ml
保存条件: 4℃
保质期: 2年
产品描述
- 采用纳米技术，具有生物相容性，可生物降解。
- 可适用于各种真核细胞系的DNA转染，siRNA转染以及共转染。
- 可适用于各种原代细胞的siRNA转染。
- 转染试剂使用前如有少量沉淀，请用振荡器混匀，不影响产品品质。
- 质粒DNA必须溶解于ddH2O，若溶解于Buffer，转染效率下降70%，甚至导致转染失败。
- 在复合物制备过程中绝对不能用任何试剂对核酸或转染试剂进行稀释，只需俩者按比例直接混合即可。否则转染效率下降80%，甚至导致转染失败。
- 核酸与转染试剂混合后，用移液器约吹吸15次进行充分混匀，并确保管壁无液体残留。
- 核酸与转染试剂混匀后至少室温孵育10分钟。
- 在整个转染实验过程中都可以用完全培养基进行细胞培养，无需用到无血清培养基。
- 转染后若在显微镜下观察到白色或黑色的圆形颗粒物，此为纳米颗粒。
操作流程
- 常规操作提前一天将细胞种植于细胞培养板，以转染时细胞汇合度在60-80%为宜，待细胞状态良好时进行转染。
- 将核酸与转染试剂直接混合后用移液枪吹吸约15次进行充分混匀，室温孵育10分钟，即核酸-纳米复合物制备完成，复合物制备过程中确保管壁无液体残留。
- 将核酸-纳米复合物加入细胞中并轻柔混匀，放入培养箱中继续培养。
- 转染24-48小时后对细胞进行换液。
反向操作
- 将核酸与转染试剂直接混合后用移液器吹吸15次进行充分混匀，室温孵育10分钟，即核酸-纳米复合物制备完成。复合物制备过程中确保管壁无液体残留。
- 将细胞状态良好且汇合度为60-80%的细胞与核酸-纳米复合物分别加入细胞培养板（不分先后）并轻柔混匀，放入培养箱中继续培养。
- 转染24-48小时后对细胞进行正常换液。
注：
- 复合物的制备需在离心管中单独完成。
- 质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率，48-96小时检测mRNA或蛋白表达，若进行稳定表达细胞株的筛选，则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选。
- siRNA转染后9小时荧光检测转染效率，48-72小时检测mRNA或蛋白表达。
- 质粒DNA转染后可长时间表达目的基因（可达俩周左右）。
- 加强转染法：若第一次转染后转染效率不理想，可在转染后第二天继续添加核酸-纳米复合物进行转染，可进一步提高转染效率。
转染梯度
一
二
三
DNA转染
DNA
1.5ug
2ug
2.5ug
转染试剂
1.5ul
2ul
2.5ul
siRNA转染
siRNA（20μM）
1.5ul
2ul
2.5ul
转染试剂
1.5ul
2ul
2.5ul
培养基总量
300ul
300ul
300ul
注：
- 上表数据均以24孔板单孔为例。其他规格培养板单孔数据。如：96孔板将上表数据除以4；12孔板将上表数据乘以2，以此类推。
- 梯度一适用于好转染细胞，如HEK293T等；梯度二适 用于相对难转染细胞,如SH-SY5Y等;梯度三适用于 难转染细胞,如RAW264.7等;对于极其难转的细胞, 根据上表转染试剂用量调整至3μl-5μl进行转染。
- 质粒DNA(μg)和siRNA(μl)与转染试剂(μl)的 比例均为1:1,可根据此比例自行设计用量。
- 上表中siRNA浓度为20μM,若siRNA浓度为40μM, 则根据上表siRNA用量数据减半;若浓度为10μM, 则根据上表siRNA用量数据翻倍,以此类推。
注意事项 :
- 根据上表及实验需求对各类核酸进行比例调整；
- 先将各类核酸混匀后再与转染试剂混合。
